محبوبترین نویسندگان :
نویسندگان مقالات پربازدید :
بیوشیمی مولکولی و سلولی 2013
جزئیات رویداد
همایش ، رویداد ، ژورنال
اینستاگرام تی پی بین
حوزه های تحت پوشش رویداد

  • purification and characterization of aminoglycoside phosphotransferase aph(6)-id, a streptomycin-inactivating enzyme

    نویسندگان :
    کلمات کلیدی :
    جزئیات بیشتر مقاله
    • تاریخ ارائه: 1392/07/24
    • تاریخ انتشار در تی پی بین: 1392/07/24
    • تعداد بازدید: 832
    • تعداد پرسش و پاسخ ها: 0
    • شماره تماس دبیرخانه رویداد: -
     as part of an overall project to characterize the streptomycin phosphotransferase enzyme aph(6)-id, which confers bacterial resistance to streptomycin, we cloned, expressed, purified, and characterized the enzyme. when expressed in escherichia coli, the recombinant enzyme increased by up to 70-fold the minimum inhibitory concentration needed to inhibit cell growth. size-exclusion chromatography gave a molecular mass of 31.4 ± 1.3 kda for the enzyme, showing that it functions as a monomer. activity was assayed using three methods: (1) an hplc-based method that measures the consumption of streptomycin over time; (2) a spectrophotometric method that utilizes a coupled assay; and (3) a radioenzymatic method that detects production of 32p-labeled streptomycin phosphate. altogether, the three methods demonstrated that streptomycin was consumed in the aph(6)-id-catalyzed reaction, atp was hydrolyzed, and streptomycin phosphate was produced in a substrate-dependent manner, demonstrating that aph(6)-id is a streptomycin phosphotransferase. steady-state kinetic analysis gave the following results: k m(streptomycin) of 0.38 ± 0.13 mm, k m(atp) of 1.03 ± 0.1 mm, v max of 3.2 ± 1.1 μmol/min/mg, and k cat of 1.7 ± 0.6 s−1. our study demonstrates that aph(6)-id is a bona fide streptomycin phosphotransferase, functions as a monomer, and confers resistance to streptomycin.

سوال خود را در مورد این مقاله مطرح نمایید :

با انتخاب دکمه ثبت پرسش، موافقت خود را با قوانین انتشار محتوا در وبسایت تی پی بین اعلام می کنم
مقالات جدیدترین رویدادها
مقالات جدیدترین ژورنال ها