مطالعه اثر سلول های بنیادی مزانشیمی رت به عنوان لایه تغذیه کننده در جداسازی و کشت سلول های بنیادی جنینی موش

مواد و روش ها: ابتدا سلول های بنیادی مزانشیمی از مغز استخوان رت استخراج شده و در محیط 10% ,dmem سرم جنین گاوی کشت داده شدند. برای اطمینان از ماهیت مزانشیمی آن ها، سلول های کشت داده شده به مدت 21 روز در حضور مواد القا کننده تمایز به استخوان کشت شدند و در پایان این مدت تمایز سلولی با رنگ آمیزی اختصاصی بررسی شد. بلاستوسیست ها از موش های حامله نژاد balb/c به دست آمدند و بر روی لایه تغذیه کننده msc و محیط  10% ,dmem fbsکشت داده شدند. 2 روز بعد از کشت، زونا پلوسیدا خارج شد، سلو ل های چسبیده به لایه تغذیه کننده تریپسینه شده و توده سلولی داخلی به خوشه های کوچک چند سلولی تبدیل شد. سپس توده های حاصل بر روی پلیت های 12 خانه ای پوشیده شده با msc ها قرار گرفت. هیچ گونه ماده رشد یا سایتوکاین به محیط اضافه نشد. 2-3 روز پس از پاساژ، کلونی هایی تشکیل شد که بر اساس مورفولوژی به کلونی های escs شباهت داشتند. مطابق روش فوق، کلونی های حاصل تا دو بار دیگر بر روی msc ها پاساژ داده شدند و نهایتاً ماهیت کلونی های رشد کرده حاصل از طریق بررسی های مورفولوژیک و نیز رنگ آمیزی با آلکالین فسفاتاز مورد بررسی قرار گرفت.