جداسازی و تخلیص آنزیم گلوکزاکسیداز از قارچ های خاک منطقه شهر صدرا

مقدمه: گلوکز اکسیداز به طور وسیعی در صنایع شیمیایی و هم چنین پزشکی مورد استفاده قرار می گیرد. به واسطه کاربردهای گسترده این آنزیم، بهبود شرایط تولید و تخلیص آن ضوروری به نظر می رسد. هدف از انجام این مطالعه بررسی جداسازی و تلخیص آنزیم گلوکز اکسیداز از قارچ های خاک منطقه شهر صدرا بود.

روش کار: نمونه خاک از 11 منطقه جغرافیایی شهر صدرا جمع آوری شده، سوسپانسیون هایی با غلظت 1.10 تا 1.10000 از آن تهیه گردید. مقدار 100 میکرولیتر از هر رقت به محیط کشت pda انتقال داده شد و پس از رشد قارچ ها و کشت مجدد در فلاسک محیط کشت pda به مدت 15 روز، خالص سازی قارچ ها انکوبه گردید. با اندازه گیری فعالیت ویژه ی آنزیم گلوکز اکسیداز ترشح شده توسط هر نمونه ی قارچی، بهترین قارچ تولید کننده، آسپرژیلوس نایجر، تشخیص داده شد. با استفاده از رسوب دادن آنزیم در محیط 80 درصد اشباع شده با آمونیوم سولفاتو دیالیز باغشاء استات سلولز و در نهایت با تخلیص با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یونی با deae-cellulose، اندازه گیری فعالیت آنزیم، به روش گلوکزاکسیداز و پروتئین تام به روش بیوره انجام پذیرفت. همه مراحل با سه بار تکرار انجام شد. و داده ها را نرم افزار 11spss مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. مرتبه ی تلخیص fold of purification ودرصد آنزیم فعال باقیمانده (yield)، محاسبه گردید.

نتیجه گیری: مرتبه ی خالص سازی پس از طی مراحل چهار گانه ی شیرابه، اشباع با آمونیوم سولفات، بعد از دیالیز و کروماتوگرافی ستونی آنیونی، به 52.88 رسید و 54.7 درصد از آنزیم در نمونه ی خالص شده (yield) به صورت فعال، باقی ماند.