بیان ژن و تخلیص آنزیم لوسیفراز و سنجش atp سلولی

روش ها: cdna کدکننده لوسیفراز گونه l. turkestanicus از ناقل pqe30 به ناقل بیانی pet28a منتقل و ناقل نوترکیب بیانی pltu28a ساخته شد. این ناقل در باکتری e. coli سویه xl1blue بیان و تخلیص لوسیفراز نوترکیب با استفاده از ستون نیکل سفارز و در یک مرحله انجام شد. فعالیت آنزیم با استفاده از دستگاه لومینومتر بررسی و مقدار vmax, km آنزیم نسبت به atp اندازه گیری گردید. با استفاده از کیت شرکت پرومگا و روش طراحی شده به کمک آنزیم لوسیفراز و سریال رقت از atp، یک منحنی استاندارد رسم شد. سپس به کمک محیط کشت حاوی باکتری، منحنی سنجش غلظت باکتری ها برای کیت شرکت پرومگا و روش طراحی شده رسم گردید.

یافته ها: نتایج این پژوهش نشان می دهد که انتقال cdna کدکننده لوسیفراز l. turkestanicus به داخل وکتور pet28a و ترانسفورم کردن آن به درون باکتری های مستعد به طور کامل انجام شده است. پس از رشد باکتری های نوترکیب، کلونی های مثبت به سهولت و به کمک لوسیفرین انتخاب و کشت داده شد. تصویر ژلsds-page  نشان می دهد که تخلیص آنزیم لوسیفراز به کمک رزین نیکل سفاروز با خلوص بالائی انجام شده است. منحنی های استاندارد سنجش atp و سنجش غلظت باکتری ها با استفاده از کیت شرکت پرومگا و کیت طراحی شده به کمک آنزیم لوسیفراز نشانده نده همسانی بالای این دو روش در تشخیص میزان atp می باشند.

نتیجه گیری: مطالعه منحنی های حاصل از سنجشatp  و سنجش غلظت باکتری ها در مورد کیت پرومگا با کیت طراحی شده نشان دهنده کیفیت بالای کیت طراحی شده و قابلیت آن در سنجش atp و استفاده های دیگر از این کیت را تایید می کند.