بررسی تمایز سلول های بنیادی مزانشیمی جدا شده از مغز استخوان موش به غضروف در کشت سه بعدی با استفاده از ژل آلژینت

هدف: هدف از انجام این مطالعه کشت سه بعدی سلول های بنیادی مزانشیمی موشی در داخل ژل آلژینت و بررسی تمایز به غضروف آن می باشد.

روش بررسی: موش های nmri با سن تقریبی 6-4 هفته قربانی شدند و سلول های مغز استخوان آنها با تراکم کم (به تعداد 500 سلول در هر خانه از ظروف 6 خانه ای) کشت شد. با انجام دو پاساژ متوالی، جمعیت خالصی از سلول های فیبروبلاستی ظاهر شد. به منظور کشت سه بعدی و تمایز به غضروف، ده میلیون سلول حاصل از پاساژ دو، در ده میلی لیتر محلول آلژینت معلق شد و سوسپانسیون حاصل به ده قسمت مساوی تقسیم شد و در ظروف 12 خانه ای توزیع گردید. با استفاده از محلول کلرید کلسیم، سوسپانسیون سلول های مزانشیمی به حالت ژل در آمد. به منظور تمایز به غضرف، محیط کندروژنیک حاوی 10 نانوگرم فاکتور رشد 10 ,tgf-b3 نانوگرم bmp-6 به ژل حاوی سلول های مزانشیمی اضافه شد. در پایان مدت کشت (3 هفته)، وقوع تمایز با بهره گیری از روش های رنگ آمیزی اختصاصی تولوئیدن بلو، تکنیک rt-pcr و فراساختار مورد ارزیابی قرار گرفت.

نتیجه گیری: سلولهای مزانشیمی موشی، در کشت سه بعدی در داخل ژل آلژینت، به راحتی فنوتیپ غضروف را کسب می نمایند. نکته جالب توجه این است که در پایان این دوره تمایز، سلولها از لحاظ فراساختاری فعال به نظر می رسند.