-
استرپتوکیناز: استخراج ،کلون سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال با رویکرد تسهیل در فرآیند خالص سازی
جزئیات بیشتر مقاله- تاریخ ارائه: 1388/01/01
- تاریخ انتشار در تی پی بین: 1388/01/01
- تعداد بازدید: 506
- تعداد پرسش و پاسخ ها: 0
- شماره تماس دبیرخانه رویداد: -
سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته شده ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis h46a (پربازده از نظر تولید استرپتوکیناز) برای اولین بار در ایران بود تا پس از استخراج dna، ژن استرپتوکیناز بگونه ای تکثیر شود که امکان کلون سازی آن در حاملهای متعدد بوجود آید.
روش بررسی: پس از استخراج dna ژنومی ژن استرپتوکیناز از دو ناحیه با استفاده از دو پرایمر بالادست و یک پرایمر پایین دست ضمن در نظر گرفتن یک جایگاه آنزیم برش دهنده معمول برای دو سر محصولات (کل 1323 bp, orf و قسمت مربوط به پروتئین بالغ، (1245 bp تکثیر شد و در حامل pgex-4t-2 تحت پروموتور قوی tac و قابلیت بیان بالا کلون شد. پلاسمید نوترکیب حاصل بوسیله عملیات هضم دو طرفه و تعیین توالی، تأیید و در اشریشیاکلی سویه bl21(de3) plyss ترانسفورم شد. میزان بیان و فعالیت استرپتوکیناز نوترکیب مربوط به کلون واجد قطعه 1245pb با استفاده از دانسیتومتر لیزری و تست اختصاصی با سوبسترای s2251 در مقایسه با یک نمونه استرپتوکیناز خارجی مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته ها: استفاده از یک آنزیم برش دهنده برای دو سر قطعه ژن، کلون شدن آن را در تعداد زیادی از حامل های بیانی امکان پذیر ساخت. میزان بیان پروتئین نوترکیب به بیش از 45% کل پروتئینهای میزبان، موفقیت در کلون سازی را تأیید کرد. وجود دم اتصالی گلوتاتیون s ترانسفراز (gst) مانع فعالیت استرپتوکیناز نشد و مقدار آن بدون بهینه سازی و تخلیص شرایط کشت بیش از 15000u/ml از کشت ثبت شد.
نتیجه گیری: استفاده از حامل pgex-4t-2 ضمن تولید استرپتوکیناز نوترکیب فعال و با بازدهی فراوان، دم gst را نیز به ابتدای آمینی آن اضافه می کند که می توان از آن برای تخلیص یک مرحله ای و آسان با استفاده از لیگاند گلوتاتیون سود برد.
حوزه های تحت پوشش رویداد
مقالات جدیدترین رویدادها
-
استفاده از تحلیل اهمیت-عملکرد در ارائه الگوی مدیریت خلاقیت سازمانی و ارائه راهکار جهت بهبود
-
بررسی تاثیر ارزش وجوه نقد مازاد بر ساختار سرمایه شرکت های پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران
-
بررسی تأثیر سطح افشای ریسک بر قرارداد بدهی شرکت های پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران
-
بررسی تأثیر رتبه بندی اعتباری مبتنی بر مدل امتیاز بازار نوظهور بر نقد شوندگی سهام با تأکید بر خصوصی سازی شرکت ها
-
تأثیر آمیخته بازاریابی پوشاک ایرانی بر تصویر ذهنی مشتری پوشاک ایرانی (هاکوپیان)
-
بررسی مبانی فمینسیم از منظر قرآن و روایات
-
تعیین ضریب رفتار تونل با در نظرگرفتن اندرکنش خاک و سازه
-
بررسی تاثیر تبلیغات اینترنتی بر تصمیم خرید مشتریان در خصوص پوشاک تولید داخلی شهر رشت
-
بررسی سیستم مدیریت روسازی (pms) در کشورهای مختلف
-
single and combined effects of bottom cracking (bca) and propylene booster (pba) separate particles additives addition to a fluid catalytic cracking (fcc) catalyst on the fcc product distribution and quality
مقالات جدیدترین ژورنال ها
-
مدیریت و بررسی افسردگی دانش آموزان دختر مقطع متوسطه دوم در دروان کرونا در شهرستان دزفول
-
مدیریت و بررسی خرد سیاسی در اندیشه ی فردوسی در ادب ایران
-
واکاوی و مدیریت توصیفی قلمدان(جاکلیدی)ضریح در موزه آستان قدس رضوی
-
بررسی تاثیر خلاقیت، دانش و انگیزه کارکنان بر پیشنهادات نوآورانه کارکنان ( مورد مطالعه: هتل های 3 و 4 ستاره استان کرمان)
-
بررسی تاثیر کیفیت سیستم های اطلاعاتی بر تصمیم گیری موفق در شرکتهای تولیدی استان اصفهان (مورد مطالعه: مدیران شرکتهای تولیدی استان اصفهان)
-
بررسی تاثیر اتحاد استراتژیک در ارتقای عملکرد شرکت ها
-
ساختار کالبدی محله در شهـرهای ایرانـی-اسـلامی
-
کیفیت حاکمیت شرکتی و ساختار سرمایه در بانک های پذیرفته شده در بورس اوراق بهادار تهران
-
assessment of metallic pollution (hg, pb, cd, cu) in water and sediments of fish ponds located in a lowland of the city of daloa
-
effect of support nature on performance and kinetics of nickel nanoparticles in toluene hydrogenation
سوال خود را در مورد این مقاله مطرح نمایید :