جداسازی، شناسایی و همسانه سازی جایگاه انتقال دهنده اگزوتوکسین آسودوموناس آئروژینوزا

اهداف: اگزوتوکسین a سودوموناس آئروژینوزا از مهم ترین فاکتورهای بیماری زایی این باکتری است. اگزوتوسین a از سه دومن اتصال دهنده، انتقال دهنده و کاتالیتیک تشکیل شده است. این سم از طریق ریبوزیله کردن فاکتور ef-2 پروتئین سازی باعث مهار سنتز پروتئین در سلول های یوکاریوت می شود. دومین انتقال دهنده نقش مهمی در انتقال سم به داخل سلول دارد. هدف از این مطالعه تولید نوترکیبی دومن انتقال دهنده اگزوتوکسین a جهت تولید آنتی بادی علیه آن بود.

مواد و روش ها: باکتری از بیماران بستری دچار سوختگی بیمارستان آیت الله موسوی زنجان، جدا و با آزمایشات بیوشیمیایی گونه سودوموناس شناسایی شد. dna باکتری استخراج و وجود ژن اگزوتوکسین a روی کروموزم باکتری از طریق pcr تایید شد. دومن انتقال دهنده اگزوتوسین a توسط pcr تکثیر و محصول pcr روی ناقل pet28a کلون شد. کلون ها از طریق pcr، هضم آنزیمی و توالی یابی غربالگری شدند. پروتئین نوترکیب از طریق sds-page و وسترن بلاتینگ با آنتی بادی اختصاصی مورد تایید قرار گرفت.

یافته: نتایج pcr و برش آنزیمی نشان دهنده همسانه سازی ژن دومن انتقال دهنده اگزوتوکسین a بود. همچنین توالی یابی بازهای دومن انتقال دهنده با اطلاعات بانک ژنی یکسان بود. بیان پروتئین نوترکیب دومن انتقال دهنده در غلظت یک میلی مولار iptg، مدت زمان انکوباسیون 12 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد تعیین شد.

نتیجه گیری: نتایج حاصل از بیان پروتئین نشان دهنده بیان نشان دهنده بیان بالای پروتئین نسبت به سودوموناس آئروژینوزا است و از آنجا که کل سم اگزوتوکسین a جهت تولید واکسن ضروری نیست، پروتئین نوترکیب می تواند جهت تولید واکسن استفاده شود.