تهیه، تخلیص و شناسایی اجزاء آنتی ژن های دفعی- ترشحی تاکی زوئیت های توکسوپلاسماگوندی سویه rh

سابقه و هدف: مطالعات قبلی نشان داده است که آنتی ژن های دفعی- ترشحی (e/sa) تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی می توانند نقش مهمی در بیماری زایی، مصونیت میزبان در برابر آلودگی مجدد به انگل، تشخیص و افتراق مرحله حاداز مزمن توکسوپلاسموز داشته باشند. برای بررسی دقیق تر موارد فوق نیاز به اجزاء تلخیص شده این آنتی ژن ها می باشد. بنابراین هدف مطالعه حاضر تهیه، تخلیص و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده این آنتی ژن ها و تعیین روش مناسب برای این منظور بود.

مواد و روش ها: 10⁸×2 تاکی زوئیت توکسوپلاسما گوندی در دو میلی لیتر محیط کشت rpmi-1640 (در لوله های درب پیچ دار) سوسپانسیون و به مدت یک ساعت در 37 درجه سانتی گراد تحت تکان ملایم قرار گرفتند، سپس محتوای هر لوله سانتریفوژ (15 دقیقه در g1000) و مایع رویی به عنوان محلول حاوی e/sa دیالیز و تغلیظ گردید. در مرحله بعد این محلول به طریق کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با ستون ژل سفادکس g-2000 به ابعاد 2.5×40 سانتی متر و خروجی 15 میلی لیتر در ساعت و کروماتوگرافی مبادله یون با ستونی به ابعاد 1×15 سانتی متر از ژل کربوکسی متیل با خروجی 60 میلی لیتر در ساعت تحت شیب خطی ph تفکیک گردید. بعد از آن اجزاء حاصل به روش native-page الکتروفورز شدند.

یافته ها: e/sa در ژل فیلتراسیون به سه جزء تفکیک شد، اما از کروماتوگرافی مبادله یونی آن دو پیک حاصل شد که پیک دوم در الکتروفورز native-page به یک باند تجزیه گردید.

نتیجه گیری: نتایج نشان می دهد که کروماتوگرافی مبادله یون با شرایط این مطالعه روشی مناسب برای تفکیک e/sa (تهیه شده به روش پیشنهادی) تاکی زوئیت های توکسوپلاسما گوندی می باشد، زیرا بدون تغییر ساختار مولکولی پروتئین، اجزائی با درجه خلوص بالا و به میزان نسبتاً زیادی حاصل می شود.